اضافه شدن کتاب جدید آموزشی با عنوان ساخت لامپ زنون برلیانس در مدارس ابتدایی

متداول ترین منبع نور مورد استفاده برای میکروسکوپ فلورسانس، لامپ قوس جیوه یا لامپ زنون برلیانس است (نولت، پاولی، و هورینگ، 2006؛ پلوم، 1999).

اینها منابع نور شدیدی هستند که مقدار زیادی گرما تولید می کنند که می تواند به نمونه های زنده آسیب برساند. بنابراین یک فیلتر جذب حرارت (موجود از سازنده میکروسکوپ) باید در مسیر نور، درست بعد از محفظه لامپ قرار گیرد.

برای به دست آوردن روشنایی یکنواخت در کل میدان دید، تراز کردن لامپ قوس ضروری است تا در فوکوس و مرکز صفحه کانونی پشتی عدسی شیئی قرار گیرد که به آن روشنایی کوهلر می گویند (Inoué & Spring, 1986). ؛ واترز، 2005).

هنگامی که لامپ قوس در صفحه کانونی پشتی عدسی شیئی فوکوس دارد، عدسی شیئی یک تصویر حداکثر خارج از فوکوس از منبع نور را بر روی نمونه پخش می کند.

این یکنواخت روشنایی نمونه را فراهم می کند. برای مشاهده تصویر قوس در صفحه کانونی پشتی شی، یک عدسی شیئی را از قسمت دماغه باز کرده و یک تکه کاغذ روی صحنه قرار دهید.

از لنز جمع‌آوری که در جلوی محفظه لامپ وجود دارد، استفاده کنید تا تصویر قوس را روی کاغذ متمرکز کنید. دو پیچ ترجمه روی محفظه لامپ به حرکت لامپ در X و Y اجازه می دهد تا آن را در میدان دید متمرکز کند.

بسیاری از محفظه های لامپ دارای آینه ای در پشت قوس هستند تا نور مسیر نوری را که در غیر این صورت از بین می رفت منعکس شود. اگر یک آینه وجود داشته باشد، سه پیچ اضافی در پشت محفظه لامپ وجود خواهد داشت که آینه را به صورت Z، X و Y حرکت می دهد تا تصویر منعکس شده لامپ نیز بتواند در صفحه کانونی پشتی متمرکز و متمرکز شود. هدف.

هنگامی که در موقعیت خوش شانسی هستید که نمونه ای بسیار روشن برای دوربین دارید، اغلب فیلترهای چگالی خنثی در مسیر نور بین محفظه لامپ و مجموعه فیلتر وجود دارد که می توان از آنها برای کاهش نور استفاده کرد. این فیلترها اغلب با برچسب “ND” و سپس عددی هستند که مخرج کسر نوری است که فیلتر اجازه عبور از آن را می دهد. به عنوان مثال، یک فیلتر ND 4 اجازه می دهد تا یک چهارم نور روشن کننده به نمونه برسد.
متداول ترین منابع نور مورد استفاده برای میکروسکوپ فلورسانس لامپ های قوس جیوه (Hg) و زنون (Xe) هستند. اگرچه لامپ‌های جیوه دارای حداکثر شدت قابل استفاده هستند (مانند طول موج‌های تحریک فلورسین، رودامین و BFP)، لامپ‌های قوس Xe درخشندگی طیفی نسبتاً یکنواختی را ارائه می‌کنند و مانند تصویربرداری نسبت، منبع نور انتخابی برای کاربردهای FRET هستند.

هنگامی که این لامپ ها با تک رنگ یا فیلترهای مناسب ترکیب می شوند، می توان طول موج های تحریک مورد نیاز را برای تولید یک طیف کامل برای FRET انتخاب کرد. از آنجایی که این لامپ ها مقادیر زیادی تابش در اشعه مادون قرمز (IR) ایجاد می کنند، لازم است قبل از ورود نور به میکروسکوپ از یک فیلتر حرارتی استفاده شود.

چنین فیلترهایی معمولاً در دیافراگم پشت میکروسکوپ نصب می شوند. همچنین می توان از فیبرهای نوری یا راهنماهای نور مایع برای رساندن نور به پشت میکروسکوپ یا مستقیماً به نمونه استفاده کرد.

لیزرها نور منسجم تری ارائه می دهند که شدت آن فقط در طول موج های گسسته در سطوح قابل قبول است. لیزرهای آرگون و نیتروژن را می توان همراه با ماژول های رنگی موجود در بازار برای تولید نور در طول موج های مختلف استفاده کرد.

به عنوان مثال، یک لیزر نیتروژن پالسی با خط اصلی در 337 نانومتر می تواند برای پوشش محدوده 360 تا 950 نانومتر در صورت ترکیب با ماژول های رنگ مناسب استفاده شود. اگرچه برای FRET حالت پایدار قابل استفاده است، اما این لیزر پالسی برای کاربردهای FLIM به دلیل زمان پالس (~ 3 ns) به ترتیب طول عمر بیشتر فلوروفورها انتخابی نیست.

درعوض، لیزرهایی که وضوح زمانی ~100ps را ارائه می‌دهند برای FRET با استفاده از FLIM مورد نیاز هستند. یکی از گزینه‌ها استفاده از لیزر مادون قرمز پالس Ti:Sapphire Pumped لیزری است که بین 700 تا 1000 نانومتر، با یا بدون دوبرابر فرکانس قابل تنظیم است و طول موج‌های تحریک 350 تا 1000 نانومتر را تولید می‌کند. علاوه بر این، لیزرهای پالسی را می توان برای “یخ زدن” تصاویر، مشابه فلاش با دوربین استفاده کرد.

در نهایت، دیودهای ساطع کننده نور (LED) در کاربردهای FLIM در کووت ها امیدوارکننده هستند. با این حال، در حال حاضر تابش نور آنها برای ترکیب آنها با سیستم های نوری پیچیده ای که در تصویربرداری سلول های منفرد استفاده می شوند، کافی نیست.